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  透射金相顯微鏡下一樣,需要將酶反應產物轉變金相顯微鏡成含有重金屬(如鍬)的沉澱。金相顯微鏡在掃描電鏡下,通過收集這些重金屬元素的背散射電子信號來確定酶的位置並從而定位抗原。

  從上面的討論可知。用千觀察免疫細胞化學樣品的掃描電鏡最好備有二次電子和背散射電子的兩種探測器。金相顯微鏡由於鐵蛋白直徑較小,而且只能觀察二次電子像,因此適用於研究表面結構簡單的對像,如紅細胞或纖維束表面的抗原。膠體金的背散射電子像使其在電鏡下辨認毫無困難、金相顯微鏡但是背散射電子像不能顯示細胞的表面形態,金相顯微鏡因此最好同時觀察二次電子像、在新型的掃描電鏡中,這兩種信號的圖像可用不同顏色顯示出來,並重益在一張照片上、

  金相顯微鏡對血細胞這樣的游離細胞最好先將其貼附於蓋玻片上顯微鏡,以便後面的處理。貼附細胞的蓋玻片表面宜硬蓋一層聚賴氨酸,為此,可將清潔的蓋玻片浸於1 mg/ml的聚賴氨酸水溶液中,半小時,水衝洗,空氣干燥,紫外線滅菌。金相顯微鏡將細胞在這樣的蓋片上孵育適當時間、直到有足夠細胞貼附於其表面。如研究的為培養細胞,尼康金相顯微鏡可令細胞直接在蓋片上生長,也可在復有Formvar和碳膜的金或鉑載網上培養。後者對於在掃描與透射電鏡下對整裝細胞(whole -cell mount)進行比較研究時特別有用。

  金相顯微鏡的細胞用PBS或培養液衝洗、如用培養液衝洗,金相顯微鏡其中不應含有血清或其它蛋白質,以避免這些物質在細胞表面的吸附。

  金相顯微鏡與透射電鏡下的免疫細胞化學方法一樣,固定條件因細胞天文望遠鏡,國產金相顯微鏡抗原種類而異。常用固定劑成份為3%-4%多聚甲醛和。、1寫~0、5腸戊二醛,用0、 lmol/L磷酸緩衝液或19:L}配制,必7、4。也可用PLP固定劑。金相顯微鏡如研究的是植物凝集素受體,可以使用1、25腸戊二醛一IaZ&作固定液。固定液的滲透壓必須仔細控制,金相顯微鏡因為它會對細胞表面形態發生明顯影響。固定條件為室溫,10^-30分鐘、固定後用PBS衝洗。
 

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